PCR實驗室裝修_規劃設計

由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測出的病毒，并具有靈敏性高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優點，因此被臨床醫生廣為認可，已廣泛應用于醫院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷。但是，這種實驗需要有能保證安全、配置合理的實驗室和非常規范的操作為前提。

臨床基因擴增檢驗實驗室設計的核心問題是如何避免污染。因此，實驗室的平面布局、空調通風系統設計、氣流控制等都是圍繞這個核心問題進行的。下面就對這幾個方面分別進行說明。

PCR實驗室平面布局

臨床基因擴增檢測實驗室原則上分為四個單獨的工作區域：試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物配置和擴增區、擴增產物分析區。為避免交叉污染，進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準備區—標本制備區—擴增反應混合物配置和擴增區—擴增產物分析區。

實驗室空調通風系統設計及壓力控制

PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為了避免各個實驗區域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。

1.試劑貯存和準備區

該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區，不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內，并在本區內制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制，本區并沒有嚴格的要求。

2.標本制備區

該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、儲存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。

本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區內不必要的走動。

3.擴增反應混合物配制和擴增區

該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA（來自樣本制備區）的加入和主反應混合液（來自試劑貯存和制備區）制備成反應混合液等也可在本區內進行。在巢式PCR測定中，通常在第_一輪擴增后必須打開反應管，因此巢式擴增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區內進行。

本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免氣溶膠在本區漏出，為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區內的不必要走動。個別操作如加樣等應在超凈工作臺內進行。

4.擴增產物分析區

該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區域可不設。

本區是主要的擴增產物污染來源，因此對本區的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。

PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結果必須作廢，需重新進行實驗。所以發生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染，首先應是預防，而不是排除。

PCR實驗室裝修_規劃設計

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